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ELISA身手测定单克隆抗体操作设施

归档日期:11-05       文本归类:科隆      文章编辑:爱尚语录

  ② TMB 贮液:称60mgTMB 溶于10mL 二甲基亚砜中,4℃避光存储。

  ①抗原包被:兔抗人IgG 举动抗原,用包被液l:8000稀释,100L/孔参加聚苯乙烯96孔响应板!

  ⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞提拔上清正在另块板上用PBS 贯串稀释(遵从1:2或1:10),100L /孔加到已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS 或空缺提拔基举动阴性对比,已知样品举动阳性对比。加盖37℃恒温箱温育1~2h。

  ⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用关闭液l :8000稀释,100L/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。

  ⑨显色:加奇怪配制的底物溶液100L/孔,室温暗处安置5~30min,显示蓝色。

  ⑩终止响应、比色:加50L/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值,阳性响应的zui大稀释度为待测样品的效价。

  ② TMB 贮液:称60mgTMB 溶于10mL 二甲基亚砜中,4℃避光存储。

  ①抗原包被:兔抗人IgG 举动抗原,用包被液l:8000稀释,100L/孔参加聚苯乙烯96孔响应板?

  ⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞提拔上清正在另块板上用PBS 贯串稀释(遵从1:2或1:10),100L /孔加到已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS 或空缺提拔基举动阴性对比,已知样品举动阳性对比。加盖37℃恒温箱温育1~2h。

  ⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用关闭液l :8000稀释,100L/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。

  ⑨显色:加奇怪配制的底物溶液100L/孔,室温暗处安置5~30min,显示蓝色。

  ⑩终止响应、比色:加50L/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值,阳性响应的zui大稀释度为待测样品的效价。

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